U kunt uw monster ook ontzouten door ultrafiltratie tot 1 tiende van het vorige volume, dat weer verdunnen en de UF-stap herhalen. De beste methode voor ontzouten is ontzouten door gelfiltratie tegen 50 mM buffer, dan ultrafiltratie (klassiek, niet centrifugaal).
Wat is ontzouten bij eiwitzuivering?
Ontzouten wordt gebruikt om zouten te verwijderen uit eiwitoplossingen, fenol of niet-opgenomen nucleotiden uit nucleïnezuren of overtollige verknopings- of labelreagentia van geconjugeerde eiwitten.
Hoe zuiver je eiwitten?
Bij de zuivering van bulkeiwitten is een gebruikelijke eerste stap om eiwitten te isoleren precipitatie met ammoniumsulfaat (NH4) 2SO4. Dit wordt uitgevoerd door toenemende hoeveelheden ammoniumsulfaat toe te voegen en de verschillende fracties neergeslagen eiwit te verzamelen. Vervolgens kan ammoniumsulfaat worden verwijderd door middel van dialyse.
Hoe buffer je uitwisselingseiwitten?
Bufferuitwisseling wordt echter uitgevoerd door eerst equilibreren met de kolomhars met de buffer waarin het monster zou moeten eindigen. In beide gevallen dragen de bufferbestanddelen die het monster in de kolom wordt vervangen door de oplossing waarmee de kolom vooraf in evenwicht is gebracht.
Welke van de volgende chromatografietechnieken kan worden toegepast voor het ontzouten van eiwitten?
Zoals hierboven vermeld, gelfiltratie kan effectief worden gebruikt voor eiwittenontzouten en wordt bewerkstelligd door eerst de gelfiltratiekolom met water in evenwicht te brengen. Bufferuitwisseling wordt echter bereikt door eerst de kolomhars in evenwicht te brengen met de doelbuffer.
