Als emissiespectra elkaar overlappen, kan echter fluorescentie van meer dan één fluorochroom worden gedetecteerd. Om deze spectrale overlap te corrigeren, wordt een proces van fluorescentiecompensatie gebruikt. Dit zorgt ervoor dat de fluorescentie die in een bepaalde detector wordt gedetecteerd, afkomstig is van het fluorochroom dat wordt gemeten.
Waarom hebben we compensatie nodig bij flowcytometrie?
Compensatie is vereist voor een flowcytometrie-experiment vanwege de fysica van fluorescentie. Een fluorochroom wordt geëxciteerd en zendt een foton uit in een reeks golflengten. Sommige van die fotonen komen terecht in een tweede detector, waardoor enkelgekleurde monsters dubbel positief lijken.
Wat is het belangrijkste doel van het gebruik van een compenserende cel?
Het primaire doel is om de ware fluorescentie te meten in het primaire kanaal dat is verontreinigd door de overloop van naburige fluoroforen. Daarom corrigeert compensatie voor fluorescentie "overtreding" tussen fluoroforen. Het is echter niet perfect en kan niet alle ongewenste effecten oplossen.
Wat is een compensatiematrix?
Een compensatiematrix wordt berekend met behulp van fluorescerende controlebestanden met één kleur die worden verzameld op de ImageStream of FlowSight waarbij alle kanalen worden verzameld en bij afwezigheid van helderveldverlichting of SSC.
Wat is spectrale compensatie?
Spectral gebruikencompensatie betekent dat signaal van niet-primaire detectoren nog steeds worden gebruikt om het echte signaal van markers waar mogelijk te versterken. De primaire controlemonsters worden gebruikt voor het benoemen van parameters. … Monsters die voor primaire detectoren worden gebruikt, helpen ook om die parameters te noemen na spectrale compensatie.
