Trypsinisatie is het proces van celdissociatie met behulp van trypsine, een proteolytisch enzym dat eiwitten afbreekt, om hechtende cellen te scheiden van het vat waarin ze worden gekweekt. Wanneer het wordt toegevoegd aan een celcultuur, breekt trypsine de eiwitten af waardoor de cellen zich aan het vat kunnen hechten.
Waarom trypsiniseren we cellen?
Trypsinisatie wordt vaak gedaan om doorgang van de cellen naar een nieuwe container mogelijk te maken, observatie voor experimenten, of vermindering van de mate van samenvloeiing in de kolf door verwijdering van een percentage van de cellen.
Hoe werkt trypsine om cellen los te maken?
Trypsin/EDTA is een gecombineerde methode om cellen los te maken. Trypsine snijdt de adhesie-eiwitten in cel-cel- en cel-matrix-interacties door het aminozuur van de adhesie-eiwitten te knippen, specifiek bij lysine of aginine op het C-uiteinde als het stroomopwaartse aminozuurgeen proline is.
Hoe krijg je getrypsiniseerde hechtende cellen?
Procedure
- Verwijder het medium door aspiratie uit het kweekvat en was de monolaag met een zoutoplossing die vrij is van Ca2+ en Mg 2+ om alle sporen van serum te verwijderen. …
- Doe genoeg trypsine of trypsine/EDTA-oplossing in kweekvat(en) om de monolaag van cellen volledig te bedekken en plaats deze gedurende ~ 2 minuten in een incubator van 37 °C.
Hoe schakel ik trypsine in celcultuur uit?
Zodra de cellen los lijken te staan, 2 volumes toevoegenvan voorverwarmde complete groeimedia om trypsine te inactiveren. Verspreid het medium voorzichtig door meerdere keren over het cellaagoppervlak te pipetteren om herstel van >95% van de cellen te garanderen. Voor serumvrije culturen, soja-trypsine-remmer (productnr.
