Zodra de cellen los lijken te staan, 2 volumes voorverwarmde complete groeimedia toevoegen om trypsine te inactiveren. Verspreid het medium voorzichtig door meerdere keren over het cellaagoppervlak te pipetteren om herstel van >95% van de cellen te garanderen.
Hoe stop ik de activiteit van trypsine?
De vertering van trypsine kan worden gestopt door bevriezing of door de pH van de reactie onder pH 4 te verlagen door mierenzuur, azijnzuur of trifluorazijnzuur toe te voegen (trypsine zal weer actief worden wanneer de pH wordt verhoogd tot boven pH 4). Verteerde monsters kunnen bij -20°C worden bewaard.
Wat neutraliseert trypsine?
Een buffer met calcium- en magnesiumionen zal ook de activiteit van trypsine vertragen. FBS is echter de meest effectieve manier om de activiteit van trypsine te remmen.
Inactiveert serum trypsine?
Serum inactiveert de resterende trypsine die achterblijft van de enzymatische vertering van de nieren en de proteolytische enzymen die vervolgens door de cellen worden gesynthetiseerd. Vers getrypsiniseerde cellen konden worden gekweekt tot monolagen in afwezigheid van serum, op voorwaarde dat ze herhaaldelijk werden gewassen om achtergebleven trypsine te verwijderen.
Hoeveel media kost het om trypsine te deactiveren?
Zolang u een minstens 1:1-verhouding van 5-10% serum-bevattend medium met uw trypsine gebruikt, moet er meer dan voldoende remming zijn, gevolgd door centrifugeren en medium uitwisseling met vers medium.